Selektion transgener Zellen - Ampicillin, Tetracyclin [Gentechnik, 5/7]
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3 سال پیش
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In diesem Video geht es
In diesem Video geht es um die Selektion transgener Zellen – ein Thema, das eingebettet ist in eine Videoreihe zum Thema Gentechnik und inhaltlich direkt verknüpft ist mit dem vorherigen Video zu den Methoden des Gentranfers. Wie ihr aus den vorherigen Videos erfahren habt, beschäftigt sich die Gentechnik mit Verfahren, mit denen man das Erbgut (die DNA) von Organismen gezielt künstlich verändern kann – häufig werden dabei Teile des Erbgutes auf einen anderen Organismus übertragen. Mithilfe von Restriktionsenzymen, die in der Lage sind, die DNA an bestimmten Stellen zu schneiden, wird das gewünschte DNA-Fragment von der gesamten, genomischen DNA isoliert, anschließend in ein Transportmolekül, einem sogenannten Vektor, integriert, welcher in eine geeignete Wirtszelle – meist Bakterien wie z.B. Escherichia Coli - eingeschleust werden kann. Als Vektoren werden häufig Plasmide genutzt – das sind kleine DNA-Ringe von Bakterien. Durch die Integration der Fremd-DNA in das Plasmid entsteht sogenannte rekombinante DNA – ein neu kombiniertes DNA-Molekül, das DNA aus mindestens zwei genetischen Ursprüngen enthält. Die Übertragung von genetischer Information in Bakterienzellen, wie hier durch das Einschleusen des Vektors in die Wirtszelle der Fall, wird auch als Transformation bezeichnet. Die transformierte Zelle ist durch diesen Vorgleich und die Aufnahme von fremder DNA zugleich eine transgene – gentechnisch veränderte – Zelle.
Die Selektion transgener Zellen nutzt man zur Überprüfung, ob der Gentransfer erfolgreich war oder nicht. Man schaut sich an, wie man aus einer Vielzahl von Zellen diejenigen Zellen selektiert – ausfindig macht -, die transgen sind und tatsächlich die Fremd-DNA in ihre Zelle integriert haben.
Tatsächlich ist ein erfolgreicher Gentransfer ein seltenes Ereignis – nur eine von ca. 10.000 Zellen nimmt tatsächlich das Plasmid mitsamt Fremdgen auf. Fehler können z.B. beim Erzeugen rekombinanter DNA auftreten; es kann sein, dass die Integration der Fremd-DNA in das Plasmid nicht gelingt – in diesem Fall enthält die Zielzelle zwar das Plasmid, allerdings ohne dem wünschenswertem Fremd-Gen. Aber auch die Aufnahme des Plasmids durch die Wirtszelle muss nicht immer gelingen – es kann also auch sein, dass der Wirtsorganismus das Plasmid gar nicht erst in seine Zelle aufgenommen hat. Nachvollziehbar, dass es von großer Bedeutung ist, diese wenigen, transgenen Zellen zu selektieren, um mit ihnen anschließend weiterarbeiten zu können.
Die Selektion transgener Zellen nutzt man zur Überprüfung, ob der Gentransfer erfolgreich war oder nicht. Man schaut sich an, wie man aus einer Vielzahl von Zellen diejenigen Zellen selektiert – ausfindig macht -, die transgen sind und tatsächlich die Fremd-DNA in ihre Zelle integriert haben.
Tatsächlich ist ein erfolgreicher Gentransfer ein seltenes Ereignis – nur eine von ca. 10.000 Zellen nimmt tatsächlich das Plasmid mitsamt Fremdgen auf. Fehler können z.B. beim Erzeugen rekombinanter DNA auftreten; es kann sein, dass die Integration der Fremd-DNA in das Plasmid nicht gelingt – in diesem Fall enthält die Zielzelle zwar das Plasmid, allerdings ohne dem wünschenswertem Fremd-Gen. Aber auch die Aufnahme des Plasmids durch die Wirtszelle muss nicht immer gelingen – es kann also auch sein, dass der Wirtsorganismus das Plasmid gar nicht erst in seine Zelle aufgenommen hat. Nachvollziehbar, dass es von großer Bedeutung ist, diese wenigen, transgenen Zellen zu selektieren, um mit ihnen anschließend weiterarbeiten zu können.
3 سال پیش
در تاریخ 1400/06/14 منتشر شده
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