Como desenhar primers: do zero à PCR

Universo da Biologia Molecular
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24.1 هزار بار بازدید - - CORREÇÃO: a diluição de trabalho
CORREÇÃO: a diluição de trabalho (1:10) deve ser 10 uL do primer (estoque) em 90 uL de água e não 10 em 100 como o cabeção aqui falou.

Aula PRÁTICA sobre como desenhar primers. Tudo o que você precisa saber sobre como desenhar primers para fazer PCR.

Nessa aula você vai aprender:
- Conceitos fundamentais
   - O que é PCR
   - O que são primers
   - O que temperatura de melting (Tm)
   - O que é temperatura de anelamento (Ta)
   - O que são estruturas secundárias (dímeros e hairpin)
- Encontrar sua sequência alvo (RefSeq - NCBI)
- Desenhar primers (Primer3Plus)
- Validar seus primers (BLAST e NetPrimer
- Como fazer o pedido dos primers
- Como diluir
- Como validá-los na bancada

Links úteis:
Encontrar a sequência alvo - RefSeq: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/
RefSeq Accession numbers: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NB...
Desenhar primers - Primer3Plus: https://primer3plus.com/cgi-bin/dev/p...
Encontrar regiões conservadas - Clustal Omega: https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clust...
Verificar as estruturas secundárias - Net Primer: http://www.premierbiosoft.com/netprimer/
Encontrar as junções exon-exon (mRNA) - Ensembl: https://www.ensembl.org/index.html


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55 سال پیش در تاریخ 1403/06/06 منتشر شده است.
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